ComplementTech C4说明书

ComplementTech成立于 2005 年，前身是Advanced Research 技术公司，ART公司成立于1993年，是一家有着20多年补体研发和生产经验的生物制品公司，为用户提供zui高质量的补体类产品及其它生物试剂产品。ComplementTech公司领导均是有数十年在科研机构从事补体领域研究的科学家，确保了公司产品的地位和*品质。ComplementTech 致力于通过就补体试剂在补体领域以及其他相关科学领域的应用中的使用提供技术建议和专业知识来推进医学研究。

一般说明

天然C4是一种天然的糖基化多肽，含有三个二硫链。C4是补体激活的经典途径和凝集素途径的激活的核心。每个途径的启动产生的蛋白水解酶复合物 (经典途径中的C1q/C1r/C1s和凝集素途径中的MBL/MASP1/MASP2) 与目标表面结合。这些酶在C4中切割一个肽键，释放过敏性毒素C4a并激活C4b。与C3一样，亚稳态C4b的硫酯具有高度活性，能够与C4b与目标表面的氨基或羟基反应并共价偶联。C4有两种变体 (C4A和C4B) 。只有一种类型的动物通常患有C4B。变体C4A和C4B的有利附着位点不同。C4A产生的亚稳态C4b主要附着在氨基上，而C4b变体产生的C4b与羟基和氨基结合良好(Law，S。K.A.和多兹。W. (1997)).表面结合的C4b是C3/C5转化酶复合物C4b、C2a形成的基础。这种酶激活C3，沉积C3b，从而将自己从一个弱的C5转化酶转化为一个具有K的高效C5转化酶m对于C5的3000倍，比C4b的要低，C2a酶单独使用(RawalN。和潘伯恩M。K. (2003)).表面结合的C4b是一种弱调理素，可被红细胞、淋巴细胞和吞噬细胞上的受体 (CR1) 识别。C4b的所有补体激活功能在产生C4c和C4d的阿尔法链被裂解时丢失。只有当C4b与C4b结合蛋白C4因子I辅助因子之一结合时，C4b结合蛋白 (C4bB P) 、膜辅助因子蛋白 (MCP) 或补体受体1 (CR1) ，蛋白酶因子I才能切割C4b。

物理特性和结构

C4是作为单链蛋白合成的，但在血浆中以205,000Da的3链分子循环。在排泄过程中，蛋白质被糖基化 (6.9 %) ，在阿尔法链中形成一个分子内硫酯，并经历有限的酪氨酸硫酸化。这个三个二硫键连接链的分子量分别为97、000 (阿尔法) 、75、000 (beta) 和33、000 (伽马) 。在补体激活过程中，C4a(8,757MW) 被从阿尔法链的n端分离出来，产生C4b(192,000Da) 。通过因子I切割表面结合的C4b，得到可溶性的C4c片段(147000Da) 和细胞结合的C4d片段 (45000Da) 。

功能

C4被经典途径的C1q-C1r-C1s复合物或凝集素途径的M1 (MBL/MASP1/MASP2复合物) 中的C1s酶进行蛋白水解激活。C4a的释放留下了亚稳态的C4b，其中硫酯能够短暂地将C4b共价附着在激活表面。这些相同的蛋白酶 (C1和M1) 裂解并激活C2，C2a亚基与C4b结合形成C3转化酶 (C4b，C2a) 。C4b是允许C2a作为蛋白酶切割C3和C5的调节亚基。在C3被裂解后，C3b被沉积在形成C5转化酶C3b、C4b、C2a的酶位点上。C3b亚基结合C5，允许C4b，C2a酶蛋白质水解C5。虽然C4b，C2a能够裂解C5，但C5的Km是3000倍，因此它在激活C5方面的效率按比例低于C3b，C4b，C2a酶。

C4B变体能够通过蛋白质上的碳水化合物和氨基共价结合。这也是其在补体激活中具有较高的溶血活性的明显来源。C4A更喜欢氨基，使其能够更好地附着在免疫复合物等蛋白质上。

天然的C3和C4通过分子内硫酯键连接其C3d或C4d结构域中的甘氨酸和谷氨酰胺残基。这些硫酯键容易受到氨、甲胺、羟胺和联氨等胺的亲核攻击，所有这些胺都已被用于灭活补体

血清

纯化的c4对冻融极为敏感，在每次冻融循环中损失510%的活性。它对诸如-20等中间温度也很敏感oC. 它在中等温度下停留的时间越长，失去的活性就越多。几个小时oC可以wan全灭活它，即使它仍然被wan全冻结。

测定

C4可以用C4缺失的人或C4缺陷的豚鼠血清进行检测，因为在没有C4的情况下，抗体致敏的绵羊红细胞 (EA) 的裂解非常差。使用EA和C4-D豚鼠血清的溶血滴度对c4非常敏感，50%的裂解需要小于1ngC4。然而，需要注意的是，有一种c4旁路，它允许c4缺陷和c4耗尽的血清在一定条件下有效地溶解EA(May，J。E.和弗兰克，M。M.(1973) ；Knutzen斯图尔，K。L.以及其他人(1989)).