ComplementTech C3 Protein说明书

名称：C3蛋白

编号：A113

规格：250 µg/vial

浓度：1.0 mg/mL (实际浓度见分析证书)

类型冷冻液体

活动：>值为70%，与正常人血清标准相比 (见分析证书) 。

纯度：>95%由SDS-PAGE

缓冲区：10 mM磷酸钠，145 mM氯化钠，pH 7.2

消缺系数。A280 nm在1.0 mg/mL时的=为1.03

分子量：185000Da (2链)

防腐剂：无，0.22µm过滤

存储：- 7 0oC或以下。避免冻融 (>每次解冻活性损失10%) 。

根源正常的人类血清 (经认证的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗体检测均为阴性) 。

预防措施在处理人体血液制品时要采取常规的预防措施。

一般说明

人类天然的C3是一种天然的糖基化 (~2.7%) 多肽，包含两条二硫键连接的链。C3是补体激活的所有三种途径的激活的核心(Law，S。K.A.和里德，K。B.M. (1995)).每个途径的起始都产生与目标表面结合的蛋白水解酶复合物 (C3转化酶) 。这些酶在C3中切割一个肽键，释放过敏性毒素C3a并激活C3b。在很短的一段时间内(~60µs) ，这种新生的C3b能够与目标表面的羟基发生反应并共价偶联。碳水化合物是shou选的目标，但蛋白质的羟基和氨基也会发生反应。这种用C3b标记目标表面的过程被称为调理作用。新生C3b的反应位点是硫酯(TackB。J.等人。 (1980);Pangburn M.K.和穆勒-EberhardH。J. (1980) )，C3b通过共价酯键与目标相连 (如果C3b附着在氨基上，则形成酰胺键) 。大多数在补体激活过程中被激活的C3永远不会附着在表面，因为它的硫酯与形成水的流体相C3b反应，而C3b被H和形成iC3b的因子迅速失活。表面结合的C3b在所有三个途径中对于有效激活C5和C5b-9复合物的形成都是必需的。表面结合的C3b及其分解产物iC3b和C3d被淋巴细胞和吞噬细胞上的许多受体识别，这些受体使用C3b配体刺激抗原呈递给适应性免疫系统的细胞。最终的结果是目标特异性b细胞和t细胞群体的扩大。

物理特性和结构

分子量：18.5万道尔顿， 由两条二硫键连接的链组成。阿尔法链是110000道尔顿 (包含C3a和C3d域) ，测试链是75000道尔顿。阿尔法链和阿尔法链是通过一个二硫键连接起来的。C3的pI约为。5.9

C3被C3转化酶切割后，C3a(77个氨基酸片段，9083Da) 从alpha链的n端释放出来，C3b(176,000Da) 变成共价附着在活化剂表面的。C3和C3b的晶体衍生结构均已被描述(Gros，P。 (2008) )，这些结果表明，在C3a-C3b肽键被裂解后，C3的C3b部分发生了很大的构象变化。

天然的C3和C4在血浆中循环，通过分子内硫酯键连接其C3d或C4d结构域中的甘氨酸和谷氨酰胺残基。这些硫酯键容易受到氨、 甲胺、羟胺和联胺等氨的亲零攻击，所有这些胺都已被用于灭活补体。

功能

C3对于有效的补体激活和随后的抗原呈现给适应性免疫系统的细胞至关重要(Lambris，J。D. (1988)).在识别目标补体后，被三种补体途径中的一种激活，并在目标表面形成酶 (C3转化酶) 。这些酶 (C4b、C2a或C3b、Bb) 在阿尔法链的Arg77后切割C3，释放过敏性毒素C3a并将C3b沉积在目标表面。虽然有一个非常弱的C3旁路系统通过经典和凝集素途径运作 (C4b，C2a可以在没有C3b的情况下激活C3b的102000)，C3b是有效C5激活所必需的(RawalN。和潘伯恩M。K. (2003)).纯化的c3对冻融极为敏感，在每个冻融循环中损失510%的活性。它对诸如-20等中间温度也很敏感oC.它在中等温度下停留的时间越长，失去的活性就越多。几个小时oC可以wan全灭活它，即使它仍然被wan全冻结。

测定

补体激活需要c3。因此，典型的C3功能检测在缺乏C3的系统中使用细胞裂解端点，除了来自被检测的来源。有三种基本的检测方法。1)抗体致敏的绵羊红细胞 (EA)可用于使用c3耗尽的人血清的ch50型检测。该方法的灵敏度约为50ngC3。2)EA和纯化的成分C1、C4和C2可用于制造EAC142细胞，利用C3进行有效的C5激活和裂解(Dodds，A。W.和Sim，R。B. (1997)).该方法的灵敏度约为5ngC3。3)另一种途径检测方法可在5mMMgEGTA存在下使用兔红细胞和c3耗尽的人血清。该方法的灵敏度约为200ngC3。

对HBsAg、HTLV-I/II、STS以及HCV、HIV1和HIV-II抗体的认证检测均为阴性。