脂质过氧化传感器C11-BODIPY 581/591说明书

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产品详情

产品描述

一、化学结构：

二、 检测原理：

C11-BODIPY 581/591是一种新型的对Lipid ROS高选择性、高灵敏的脂质过氧化传感器，与其他ROS捕获探针不同之处在于，C11-BODIPY 581/591具有好的亲脂性可以快速入膜，随后可以选择性的对细胞内和细胞膜中的脂质过氧化(Lipid ROS)进行捕获，并在氧化后仍保持亲脂性，不会离开脂质膜，该过程同时伴随荧光信号变化。多用于荧光显微镜、流式细胞分析等对Lipid ROS的可视化监测。C11-BODIPY 581/591结构中多不饱和丁间二烯基在Lipid ROS催化氧化后，其荧光发射峰从590 nm偏移至510 nm。

实验步骤

1.样品溶解：

商品开封后，离心机轻甩；随后加入适量DMSO进行溶解，溶解度至少可达25mg/mL。溶解后建议分装-20℃避光保存，尽量避免反复冻融，防止吸潮。

【注】：样品轻甩目的是为了避免痕量的探针吸附管壁损失样本。

2.样品使用：

1)流式细胞分析：

悬浮细胞：800g离心5min收集细胞沉淀；随后PBS洗涤细胞两遍。贴壁细胞：弃培养液，用常温PBS或培养液轻洗细胞2次，随后胰酶消化，800g离心5min收集细胞沉淀，随后PBS洗涤细胞两遍，每个样本收集1~5 ×105个细胞。(注意：操作过程中轻柔吹打细胞，消化时间不宜过长，剧烈吹打或胰酶消化过度会影响实验结果)

C11-BODIPY581/591用于脂质过氧化检测的推荐浓度为终浓度5μM；配制方法：用新鲜空白培养液配制终浓度为5μM的C11-BODIPY581/591染色液待用，DMSO含量≤5‰。(注意：该步操作建议在消化细胞前准备好，以免细胞消化后久置影响实验结果)

将事先配置好的脂质过氧化染色液加入收集的细胞沉淀中，推荐体积为500μL，随后置于37℃孵箱，染色30min，期间5-10min间隔轻弹细胞使其悬浮保证染色更充分。

染色结束后，800g离心5min，弃上清，随后用PBS清洗细胞2次，加入200μLPBS重悬细胞用于流式分析。

2）原位成像：

接种适当密度的细胞于20mm规格的盖玻片上（也可用共聚焦小皿替代），给予实验药物处理适当时间后，吸去培养液，用PBS洗涤细胞一遍加入500 μL配制好的脂质过氧化染色液，于37℃染色30min；（配制方法参考流式分析中的染色液配制）弃培养液，PBS洗涤细胞两遍后荧光显微镜或激光共聚焦下进行成像检测。细胞在染色后应在1 h之内完成检测。

3）检测条件：

该分子探针在还原状态下最佳激发波长为581 nm,发射为591nm；被Lipid ROS氧化后最佳激发波长为500 nm，发射在510nm。因此，在流式分析中检测通道为FL1-A；激光共聚焦检测：氧化态激发波长可选488nmFITC）通道；还原态激发波长可选561 nm（TRITC）通道。

实验案例分析

流式分析实验范例：

使用本试剂检测10 μM RSL3（铁死亡经典诱导剂）处理A549细胞24 h后的细胞脂质过氧化水平的流式检测

原位成像实验范例：

下图为RSL3（10 μM）处理A549细胞24 h后，使用本试剂（5μM）对活细胞中脂质过氧化水平进行原位染色后激光共聚焦成像结果。

注意事项

1.此试剂盒仅供科研使用。

2.使用前小心离心数秒取用，需佩戴手套操作，注意避免与皮肤、眼睛和黏膜接触。

3.本试剂盒可用检测活细胞中Lipid ROS水平，用于评价细胞铁死亡状态。