clsgmbh500286说明书
clsgmbMH-3924A
| 500286 | 冻存培养物 |
| 描述 | 从 ACI 大鼠肝癌（细胞系服务）体外建立。 |
|---|---|
| 生物 | 鼠 |
| 组织 | 肝 |
| 疾病 | 肝细胞癌 |
| 同义词 | MH 3924A、MH3924A、MH-3924 A、MH 3924 A、3924A、莫里斯肝癌 3924A、MH-3924、MH3924、MH 3924 |
| 年龄 | 16 个月 |
|---|---|
| 形态学 | 上皮样 |
| 生长特性 | 粘附的 |
| 培养基 | 记忆体 |
|---|---|
| 中等补充剂 | 10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺、4.5 g/L 葡萄糖 |
| 倍增时间 | 25-35 小时 |
| 继代培养 | 去除培养基并使用不含钙和镁的 PBS 冲洗贴壁细胞（T25 为 3-5 ml PBS，T75 细胞培养瓶为 5-10 ml）。添加Accutase（每T25 1-2 ml，每T75细胞培养瓶2.5 ml），细胞片必须*覆盖。在环境温度下孵育 8-10 分钟。用培养基 (10 ml) 小心重悬细胞，以 300 g 离心 3 分钟，将细胞重悬于新鲜培养基中，然后分装到含有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 分流比 | 建议比例为 1:4 至 1:6 |
| 播种密度 | 2 x 10^4 细胞/cm^2 |
| 流体更新 | 每 3 到 5 天 |
| 冷冻恢复 | 使用 2xT25 细胞培养瓶中冷冻管的全部内容开始培养。细胞将在 24-48 小时内恢复。 |
| 冷冻培养基 | CM-1（CLS 目录号 800150） |
| 处理冷冻保存的培养物 | 细胞在干冰上冷冻运输。请确保小瓶仍处于冷冻状态。如果不打算立即培养，冷冻管必须在到达后储存在 -150°C 以下。如果打算立即培养，请遵循以下说明： 在 37 °C 水浴中快速搅拌，在 40-60 秒内快速解冻。水浴应该有含有抗菌剂的干净水。样品解冻后，立即从水浴中取出冷冻管。一小块冰块应该仍然存在，小瓶应该仍然是冷的。从现在开始，所有操作都应在无菌条件下进行。将冷冻管转移到无菌流动柜并用 70% 酒精擦拭。小心打开小瓶，将细胞悬液转移到含有 8 ml 培养基（室温）的 15 ml 离心管中。小心重悬细胞。以 300 xg 离心 3 分钟并弃去上清液。可以省略离心步骤，但在这种情况下，必须在 24 小时后去除剩余的冷冻培养基。在 10 ml 新鲜细胞培养基中小心重悬细胞，并将它们转移到两个 T25 细胞培养瓶中。所有进一步的步骤都在 Subculture 部分中描述。 |
| 增殖培养物的处理 | 一到两个细胞培养瓶中装有细胞培养基。将整个培养基分别收集在 1 个或 2 个 50 ml 离心管中。小心地向每个 T25 细胞培养瓶中加入 5 ml 细胞培养基。在显微镜下控制细胞形态和汇合。在 37 °C 下孵育至少 24 小时。将收集的培养基以 300 xg 离心 3 分钟，以收集可能在运输过程中脱落的细胞。如果可见细胞沉淀，将细胞重悬于 5 ml 细胞培养基中并转移到 T25 细胞培养瓶中。在 37 °C 下孵育至少 24 小时。 |
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