clsgmbh不培养的支原体检测说明书
产品概述
细胞系、细胞组分、生长和冷冻培养基、细胞培养服务等等。
Mycoplasma testing without c*tion
| 产品编号 | 选项 |
|---|---|
| 900159 | 不培养的支原体检测 |
| 900159.1 | 培养14天的支原体检测 |
支原体是小的原核生物，它们太小而无法在显微镜下看到，并且不能被普通抗生素试剂消除。支原体可能会影响细胞系的细胞生长、增殖和形态，从而可能导致不可靠的实验结果。大约 15% 到 35% 的实验室细胞培养物被支原体污染。因此，建议经常控制以保证无支原体的环境。
分析方法
CLS 提供支原体检测的短期和长期测试。在前者中，样品在到达后立即进行测试，而在后者中，开始细胞培养并在无抗生素培养 14 天后对细胞进行测试。支原体检测是使用两点检测系统进行的，该系统包括 PlasmoTest™ - 支原体检测试剂盒 (Invivogen) 和 Certus QC - mycoADVANCED 检测试剂盒 (Certus)。
比色报告基因测定
该测试是基于细胞的比色测定。在支原体存在的情况下，报告细胞系会诱导信号级联反应，从而触发培养基中的颜色从红色变为蓝色。该测定在 96 孔多孔板中进行。在微孔板分光光度计中检测 620-655 nm 的信号。检测到所有支原体和胆原体物种，以及细胞培养物中的其他污染物，例如细菌。结果显示在下面的条形图中：
等温扩增
等温扩增是一种基于支原体特异性 DNA 的等温扩增与使用 DNA 嵌入染料的实时检测相结合的快速且可靠的测试。该测定法可以检测出占污染 >95% 的六种常见的物种：口腔分枝杆菌、猪鼻分枝杆菌、精氨酸分枝杆菌、发酵分枝杆菌、人型分枝杆菌和莱氏分枝杆菌。由于序列同源性，还将检测到其他支原体物种（肺炎支原体、鸡毒支原体和滑膜支原体）。为了确定样品是支原体阳性还是阴性，需要研究解链温度 (Tm)。不同熔化温度的结果如下所示：
| 出色地 | 颜色 | 样品名称 | 温度 (°C) | 结果 |
| 1 | 紫色的 | 样本 | 94,65 | 消极的 |
| 2 | 粉色的 | 阳性对照 | 87,37 | 积极的 |
| 3 | 绿松石 | 阴性对照 | 94,16 | 消极的 |
等温扩增结果的评估
所有熔化温度及其各自的测试结果解释如下：
| 样本 | 以°C为单位的熔化温度（Tm） |
| 负控（NC）/内控（IC） | 94.8 +/- 0.2 |
| 阳性对照 (PC) | 87.9 +/- 0.2 |
| 支原体阳性 - 支原体DNA扩增 | 87.0 - 89.2 |
| 支原体阳性 - 被少量支原体污染；支原体 DNA 的扩增和内部对照 | 87.0 - 89.2 和 95.0 +/- 0.2 |
| 支原体阴性 - 扩大内部控制 | 95.0 +/- 0.2 |
| 被其他细菌污染或非特异性 | 89.5 - 94.0 |
比色报告分析结果的评估
如果测试呈阳性，则存在 5*10 2– 5*105范围内的菌落形成单位 (CFU)。不同支原体种类的 CFU/ml 详细列表如下所示：
| 支原体种类 | 灵敏度 CFU (ml) |
| A.laylawii | 2.5*103 |
| M. arginini | 2.0*103 |
| 发酵菌 | 5.0*102 |
| M. hyorhinis | 7.0*102 |
| 口腔杆菌 | 5.0*105 |
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