proteintechKMI-2说明书

Mouse单克隆抗体亚型鉴定试剂盒说明书

试剂盒组分

储存条件

该试剂盒在低温下运输，收到后请置于 4°C 保存，保存时间 6 个月。

操作步骤

1.材料准备

从 4°C 中取出 Mouse 单克隆抗体亚型鉴定试剂盒，室温条件下平衡 30 分钟。

a.1×PBST 10mL20×PBST+ 190mL超纯水

b.酶标板条 根据样本数量选取酶标板条数（测定1个样本需要1条酶标板条），余下板条置于密封袋中，4°C保存。

c.1×羊抗鼠IgM+IgG-HRP 10μL100×羊抗鼠IgM+IgG-HRP+990μL1×PBST

2.样本准备

a.杂交瘤细胞上清 将样本以1×PBST1:100稀释，例如10μL杂交瘤细胞上清+990μL1×PBST。推荐稀释范围为1:20-1:200。

b.腹水 将样本以1×PBST1:100000稀释，例如1μL腹水+1mL1×PBST（1:1000），再取上述混合液5μL +495 μL1×PBST。推荐稀释范围为1:50000-1:200000。

c.纯化抗体 将样本以1×PBST稀释至200ng/mL，推荐稀释浓度为20ng/mL-1μg/mL。

3.单克隆抗体亚型鉴定

a.将待测样本适当稀释加入板条样品孔中，50μL/孔。

a.无需孵育，将 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP加入样品孔中，50μL/孔。混匀器上轻轻混匀，也可用手轻轻敲击板架两侧 1 min。

b.盖上封板膜，室温孵育 1h。

c.弃去孔内液体，1×PBST洗板 3次，吸水纸上拍干。

d.将现配的显色液加入孔中，100μL/孔。

注：显色液配方，A 液：B 液=1:100，即 10μL A 液与 1 mL B 液混合，混匀后立即使用。

e.室温避光显色 10-20min。每孔加入终止液，100μL/孔。

f.

结果判读。结果可以对照下图以肉眼判定，也可以通过酶标仪读取OD450。颜色深或是 OD值高孔对应的即为相应亚型。注：每个样本应该在A-F中有一个阳性孔（即是样本重链类型），G和 H中有一个阳性孔（即是样本轻链类型）。

注意事项

1.显色液应临用前配制，即配即用。显色液A液应避光保存。

2.余下板条应密封保存。如短期不用，可置于-20°C保存。

常见问题与解决方案