intronbioLPS提取试剂盒

商业化的脂多糖（LPS）提取试剂盒

LPS提取试剂盒

Lipopolysaccharide（LPS）Extraction Kit

产品信息：（现货供应）

试剂盒组成

LPS背景描述：

◆脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的主要成分，结构很复杂、热稳定性*（在250℃下干热灭菌2h才*灭活）。受LPS发现的历史原因，如今LPS的概念几乎等同于内毒素（endotoxin）。LPS由多糖链和脂质A组成，不同细菌间的多糖链是高度变化的，决定细菌的血清型；而脂质A主要影响LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的级联反应和机体的毒性病理生理活动，包括释放内毒素引起感染性休克从而导致末梢血管虚脱。临床常通过检测LPS的存在来诊断脑膜炎。

◆正是LPS与机体免疫机能的密切关系，生命科学研究常常提取LPS进行相关的研究，如阐明LPS的结构，代谢，免疫学，生理学，毒性，生物合成途径；诱导生长促进因子如白介素的合成与分泌；诱导疾病研究的动物模型如炎症反应，急性肺损伤，

产品描述：

◆常用的LPS提取方法仍然是Westphal,O. (1965)使用的热酚-水法（hot phenol-water method），主要优势在于高产量，但是提取步骤繁琐，费时，以及常受蛋白质和核酸的污染，纯度低等缺点也常困扰科研工作者。

◆iNtRON提供的LPS提取试剂盒是市场上的个商品化的产品，排除传统热酚-水法的缺陷，使得科研工作者能够快速方便的从细菌中提取LPS。

产品优势：

∷适用性广，能从所有G^-菌中提取LPS（见Fig. 2）；

∷操作时间短（包括裂解在内，60min内即可完成）；操作简单方便；

∷少量细菌即可获得足够的LPS；LPS产量与细菌培养物成正比，一般使用3~5ml培养物LPS产量高；细菌适合培养体积1~2ml（OD₆₀₀=0.8-1.2）

∷LPS产率高，且重复性好（见Fig.1）；

∷提取LPS下游应用广，包括直接用于免疫刺激；

操作步骤：

1）室温离心收获细菌细胞，13，000rpm，30sec。

2）加入1ml裂解缓冲液（Lysis Buffer），剧烈涡旋混匀。

3）加入200μl氯方，剧烈涡旋混匀10-20 sec，室温孵育5min。

4）4℃，13,000rpm离心10min，转移400μl上清到新1.5ml离心管中。

5）加入800μl纯化裂解液（Purification Buffer），并混匀。-20℃孵育10min。

6）4℃，13,000rpm离心15min。

7）用1ml 70%EtOH洗涤LPS颗粒，并*干燥。

8）在LPS中加入70μlTris-HCL（10mM，pH8.0），并超声。

应用图片：

应用文献：

1）YanH.L, et al.DNA Sequencing and Identification of Serogroup-Specific Genes in the Escherichia coli O118 O Antigen Gene Cluster and Demonstration of Antigenic Diversity But OnlyMinor Variation in DNA Sequence of the O Antigen Clusters of E. coli O118 and O151. Foodborne Pathogens and Disease. 5(4): 449-457(2008).

2）HA Shui,et al. LPS-evoked IL-18 expression in mesangial cells plays a role in accelerating lupus nephritis.Rheumatology 46:1277–1284(2007).

3）R Bucki, et al..Release of the antimicrobial peptide LL-37 from DNA/F-actin bundles in cystic fibrosis sputum. European Respiratory Journal 29:624-632 (2007).

4）BH.Kim, et al.Effect of retinoids on LPS-induced COX-2 expression and COX-2 associated PGE2 release from mouse peritoneal macrophages and TNF-α release from rat peripheral blood mononuclear cells. Toxicology Letters 150(2):191-201(2004).

5）Anat Lerner, et al. The Azospirillum brasilense Sp7 noeJ and noeL genes are involved in extracellular polysaccharide biosynthesis. Microbiology 155: 4058–4068(2009).

6）Chitrita DebRoy, et al. Multiplex Polymerase Chain Reaction Assay for Detection of Nonserotypable Shiga Toxin–Producing Escherichia coli Strains of Serogroup O147. Foodborne Pathogens and Disease 7(11): 1407-1414(2010).

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