jembio DNA连接酶说明书

DNA连接酶（大肠杆菌）

DNA 连接酶（大肠杆菌）催化双链 DNA 中并列的 5' 磷酸和 3' 羟基粘性末端之间形成磷酸二酯键。

描述：

• 催化具有粘性末端的双链 DNA 片段之间形成磷酸二酯键。

• 5'-磷酰基与相邻的 3'-羟基的缩合伴随着 NAD+ 的水解。

• 适用于全长cDNA（1、2）的高效克隆。

单位定义：一个单位定义为产生 50% 的 λ DNA 的 Hind III 片段连接所需的酶量。

在 20 µl DNA 末端浓度为 0.02 µM (50 µg/ml) 的测定混合物中在 16oC 下孵育。

储存条件：储存于-20oC。

反应缓冲液：30 mM Tris-HCl（22°C 时 pH 8.0）、1 mM 二硫苏糖醇、4 mM MgCl2、26 µM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白。

最佳连接发生在 16°C。

储存缓冲液：10 mM Tris-HCl（22°C 时 pH 7.4）、50 mM KCl、0.1 mM EDTA、10 mM 硫酸铵、1 mM 二硫苏糖醇和 50% (v/v) 甘油。

质量控制：所有制备物都经过了内切核酸酶和外切酶活性的污染测试，以及连接反应中的功能测试。

连接分析条件：30 mM Tris-HCl（22°C 时 pH 8.0）、4 mM MgCl2、1.2 mM EDTA、1 mM 二硫苏糖醇、0.026 mM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白和 λ DNA 的 Hind III 片段。在 16°C 下孵育 30 分钟。