genebridgesK001说明书

Quick & Easy BAC Modification Kit

快速简便的BAC修改套件

• ID: K001

特征

• 快速可靠地克隆大DNA分子

• 在选择的位置进行的DNA修饰

• 独立于限制网站

• 没有尺寸限制

应用

• 简单的BAC修饰，如插入选择标记，删除带有选择标记基因的片段，插入功能片段和选择标记基因

• 该试剂盒也可用于细菌染色体修饰

描述

该试剂盒旨在通过革命性的Red / ET重组技术对BAC进行修饰 - 这是一种强大的工具，可在2周内将修饰（如插入和缺失）引入任何类型的BAC。

红/ ET重组使用体内重组和校对活动来小化构建体中不需要的突变。套件中包含了修改BAC所需的所有必要内容以及执行控制实验所需的所有材料，旨在让您熟悉这种新技术。另外，转化任何大肠杆菌的载体提供了用于应用Red / ET重组的感受态菌株的菌株。pSC101-BAD-gbaAtet带有四环素抗性盒。该盒含有温度敏感的复制起点（ori），只能在30°C繁殖 - 在37°C时质粒会丢失。这允许在不再需要质粒时简单地去除质粒。为了引入突变（即选择盒，如该试剂盒中包含的新霉素抗性盒），首先必须将同源序列引入选择盒。这可以通过简单的PCR反应来完成。这些短的同源序列（每个50nt）可以根据您的实验需要自由选择。只需选择要修饰的位置，并使用Red / ET重组技术将选择盒直接插入所需的核苷酸。然后需要用诱导的Red / ET重组系统在细菌中电穿孔PCR产物。在成功进行Red / ET重组后，可以使用常规DNA微量制备方法回收修饰的DNA。

内容

• pSC101-BAD-gbaA（tet）是基于Red / ET表达质粒的pSC101 ori（温度敏感起源）的衍生物

• 携带pSC101-BAD-gbaA（tet）的BAC宿主

• 用于修饰150kb BAC的阳性对照实验（携带pSC101-BAD-gbaA的宿主中的BAC克隆，用于在BAC骨架中缺失的新PCR产物，在宿主中作为阳性重组体的BAC-neo克隆）

• 方案，质粒描述，寡核苷酸图谱和序列

Sequences

Tn5-kan^R/neo^Rselection cassette

Tn5-promoterkan^R/neo^R

TGGACAGCAAGCGAACCGGAATTGCCAGCTGGGGCGCCCTCTGGTAAGGTTGGGA AGCCCTGCAAAGTAAACTGGATGGCTTTCTTGCCGCCAAGGATCTGATGGCGCAG GGGATCAAGATCTGATCAAGAGACAGGATGAGGATCGTTTCGCATGATTGAACAA GATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGCTATTCGGCTATG ACTGGGCACAACAGACAATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTTCCGGCTGTCAGC GCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGTGCCCTGAATGAA CTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGGGCGTTCCTTGCG CAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCTGCTATTGGGCGA AGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCCGAGAAAGTATCC ATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGGCTACCTGCCCAT TCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCGGATGGAAGCCGG TCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTCGCGCCAGCCGAA CTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATCTCGTCGTGACCC ATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCGCTTTTCTGGATT CATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGACATAGCGTTGGCT ACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACCGCTTCCTCGTGC TTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTATCGCCTTCTTGA

CGAGTTCTTCTGACTCGAG